Кратко и по шагам — что делать, чтобы локализовать и устранить внезапное изменение профиля контаминации в ферменторе.
1) Немедленные меры (сразу, $<24$ ч)
- Изолировать затронутый биореактор и поставить партий на карантин. Приостановить дальнейшее использование материала до результатов первичной диагностики.
- Отобрать и зафиксировать образцы: культура из ферментера (жидкость, пена), образцы крышки/патрубков/фильтров, посевы инокулята/предпосева (seed), используемые сырьё/растворы, пробы воды (WFI/очищенная), окружающие поверхности и воздух, пробники персонала (при необходимости).
- Задокументировать все события и операции перед появлением изменения (смены, ремонты, вмешательства, поставки).
2) Быстрая диагностика (первичные тесты, $24$–$72$ ч)
- Микроскопия и морфология (грам-окраска, споровые/грибковые формы) для срочной классификации.
- Быстрые идентификационные методы: MALDI-TOF, целевые ПЦР/qPCR для подозреваемых родов/видов.
- Посевы на универсальные и селективные среды (для оценки общего уровня контаминации и преобладающих групп).
- Тесты на жизнеспособность/бактериальную нагрузку (количественная оценка биоварки).
3) Глубокая идентификация и трекинг (последующие $48$–$120$ ч)
- Молекулярная идентификация: 16S rRNA/ITS секвенирование или WGS метки для точного вида и штаммовой идентификации.
- Генотипирование/фингерпринтинг (MLST, SNP-анализ или WGS) для сопоставления с образцами из окружающей среды, поставок и персонала.
- Метагеномный NGS при полимикробных профилях для полного состава сообщества.
4) Источниковая локализация (параллельно диагностикам)
- Сверка результатов идентификации с образцами: сырьё, вода, фильтры, упаковка, оборудование, перегонка воздуха, вентиляция, персонал, подрядчики, работы на линии, ремонтные мероприятия.
- Проверка целостности и валидации стерильных фильтров (интегральные тесты), сальников, уплотнений и режимов стерилизации (SIP/CIP), автоклавов, систем WFI.
- Анализ технологических параметров и аномалий: температура, pH, DO, перегрузка, режимы дозирования, пенообразование, изменение скорости аэрации, сырьевые приёмки.
5) Анализ трендов и RCA (в течение $48$–$168$ ч)
- Проследить временную корреляцию контаминации с событиями/поставками/работами.
- Провести root-cause analysis (5 Why, Ishikawa), включить междисциплинарную команду (QA, QC, производство, инженерия, снабжение).
- Оценить, является ли контаминант постоянным, эпизодическим или случайным заносом.
6) Контрольные и корректирующие действия (по результатам RCA)
- Карантин/утилизация контаминированной продукции либо оценка возможности спасения партии после риска-анализа.
- Очистка и дезинфекция/SIP/CIP по переработанным процедурам, повторная валидация.
- Замена расходников (фильтры, уплотнения), ремонт/перенастройка оборудования, проверка систем вентиляции/фильтрации.
- Усиление контроля качества сырья (входной контроль, поставщики), тестирование партий до использования.
- Обучение/смена практик персонала, пересмотр SOP по заправке, обслуживанию, aseptic technique.
7) Проверка эффективности мер (верификация, $после$ мероприятий)
- Повторный мониторинг ферментера и окружающей среды — серией контролей (например, $>3$ последовательных отрицательных результатов) и генотипирования для подтверждения устранения источника.
- Восстановление нормальной работы только после верификации и документированной валидации.
8) Профилактика и улучшения (долгосрочно)
- Пересмотр программы мониторинга (увеличить частоту, расширить точки отбора, внедрить молекулярный мониторинг).
- Ввести или усилить трекинг поставок и квотирование поставщиков, договора о качестве.
- Обновление планов на случай инцидентов и регулярные тренировки персонала.
- Ввести KPI по сокращению инцидентов контаминации и регулярный аудит систем стерильности.
9) Документация и отчётность
- Полная запись всех действий, результатов тестов, RCA и CAPA.
- При необходимости — уведомление регулятора и соблюдение требуемых процедур отчётности.
Коротко по приоритетам: срочно взять и проанализировать образцы, изолировать партию и источник, параллельно проверить оборудование/фильтры/воду/сырьё и провести молекулярную типизацию для точного связывания источника с контаминантом; затем выполнить коррективы, верифицировать их и внедрить превентивные меры.