Без нагревания осадок не выпадает, так как реакция между глюкозой и гидроксидом меди(II) является качественной, и при этом происходит образование комплексных соединений меди с глюкозой, что приводит к изменению цвета раствора. При нагревании происходит окисление глюкозы в присутствии кислорода атмосферного воздуха, что активирует реакцию образования осадка меди. Наличие альдегидной функциональной группы в глюкозе является причиной данной реакции, так как альдегид может взаимодействовать с ионами меди(II) и привести к образованию комплексов.